10.25687/1996-6733.PRODANIMBIOL.2018.2.19-30
Колоскова Е.М.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
Езерский В.А.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
Белова Н.В.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
Кутьин И.В.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
Рябых В.П.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
Трубицина Т.П.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
Максименко С.В.
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных
ГЕННО-ИНЖЕНЕРНАЯ КОНСТРУКЦИЯ ДЛЯ ЗАМЕЩЕНИЯ ГЕНА МЫШИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬЮ кДНК ЛАКТОФЕРРИНА ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ HDR С ПРИМЕНЕНИЕМ СИСТЕМЫ CRISPR / Cas9
Genetic engineered construction for substitution of mouse WAP gene by сDNA of human lactoferrin by HDR method using CRISPR/Cas9 system
Проблемы биологии продуктивных животных
2018
генно-инженерная конструкция
плазмиды
WAP мыши
лактоферрин человека
CRISPR/Cas9
HDR
genetic engineering constructions
plasmids
mouse WAP
human lactoferrin
CRISPR/Cas9
HDR method
ru
2018-08-31
Journal Article
http://bifip.ru/zhurnal/arkhiv/item/genno-inzhenernaya-konstruktsiya-dlya-zameshcheniya-gena-wap-myshi-posledovatelnostyu-kdnk-laktoferrina-cheloveka-metodom-hdr-s-primeneniem-sistemy-crispr-cas9
1996-6733
По результатам рестриктного анализа потенциальных компонентов генно-инженерной конструкции основным вектором-носителем была выбрана плазмида рJET1.2/blunt . ПЦР-амплификат кДНК чЛФ клонировали в рJET1.2/blunt с получением плазмиды рJET1.2hLf . фрагменты 3’WAP и 5’WAP, вырезанные из полученных ранее промежуточных плазмид pTZ5’WAP и pTZ3’WAP, были последовательно клонированы в рjet1.2hlf . Рестриктный и ПЦР-анализы подтвердили состав созданной плазмиды рWAPhLf. Линейная генная конструкция размером 4061 п.н. вырезается рестриктазами EagI (NotI) и ClaI , содержит 2136 п.н. кДНК чЛФ, левое и правое плечи гомологии гену кислого сывороточного белка мыши размером 945 и 980 п.н. соответственно. Полученную плазмиду (или линеаризованную генную конструкцию) предполагается использовать в качестве матрицы для замещения кодирующей последовательности гена mWAP на последовательность кДНК чЛФ по механизму прямой гомологичной рекомбинации с применением системы CRISPR/Cas9.
№2(2) (2018)